穩(wěn)定細胞株的篩選 服務(wù)介紹

穩(wěn)定細胞系是指將外源DNA克隆到具有某種抗性的載體上，載體被轉(zhuǎn)染到宿主細胞并整合到染色體中，用載體中所含的抗性標志進行篩選，篩選得到可穩(wěn)定表達目的蛋白，或者穩(wěn)定表達沉默特定基因的細胞株。常用物理方法（電轉(zhuǎn)）、化學方法（脂質(zhì)體等）、生物方法（病毒）。

穩(wěn)定細胞株的篩選  實驗原理

外源基因在細胞中的表達可分為兩大類，一類是瞬時表達，一類是穩(wěn)定表達（又叫表達）。前者外源DNA/RNA不整合到宿主染色體中，雖然可以達到高水平的表達，但通常只持續(xù)幾天。后者外源DNA整合到宿主細胞染色體上，使宿主細胞可長期表達目的基因。建立穩(wěn)定細胞株，一般是根據(jù)不同基因載體中所含有的抗性標志選用相應(yīng)的藥物對靶細胞進行篩選。常用的抗性標記基因有潮霉素（hygromycin）、新霉素（neomycin）和嘌呤霉素（puromycin）。

實驗流程：

1、載體構(gòu)建（表達質(zhì)粒載體、病毒載體）；

2、轉(zhuǎn)染/感染；

3、目的蛋白初步檢測；

4、抗生素篩選；

5、目的蛋白再次檢測（定性/半定量）；

6、單克隆細胞株穩(wěn)定性檢測。

客戶提供：培養(yǎng)好的細胞

公司提供：基本實驗步驟、圖片、數(shù)據(jù)分析結(jié)果和穩(wěn)定表達細胞株

實驗周期：大約3-4月左右，具體需要根據(jù)細胞實驗內(nèi)容而定。