一、流感動物模型構(gòu)建實驗動物選擇

1. 常用動物

• 小鼠（BALB/c、C57BL/6）：常用，成本低，易操作，但需適應(yīng)病毒（如H1N1需小鼠適應(yīng)株）。

• 雪貂：對流感病毒高度敏感，可模擬人類癥狀（發(fā)熱、噴嚏等），但成本高、飼養(yǎng)復雜。

• 豚鼠：適用于病毒傳播研究。

• 非人靈長類動物（如獼猴）：接近人類免疫反應(yīng)，但倫理和成本限制高。

2. 選擇依據(jù)

• 研究目的（致病性、傳播性、免疫應(yīng)答等）；

• 病毒宿主適應(yīng)性（如禽liu感病毒常需雪貂）。

二、病毒株準備

1. 病毒來源

• 臨床分離株（需適應(yīng)動物宿主，如小鼠連續(xù)傳代）；

• 實驗室標準株（如A/Puerto Rico/8/1934 H1N1）。

2. 病毒擴增與滴定

• 通過MDCK細胞或雞胚擴增病毒；

• 測定TCID??或PFU（空斑形成單位）以確定感染劑量。

三、流感動物模型構(gòu)建感染途徑與劑量

1. 感染途徑

• 鼻腔接種（常用）：模擬自然感染，輕麻醉后滴注病毒液（小鼠50μL，雪貂500μL）；

• 氣管內(nèi)接種：需手術(shù)暴露氣管，用于深部感染研究；

• 氣溶膠暴露：模擬空氣傳播，需專用設(shè)備。

2. 感染劑量

• 預(yù)實驗確定LD??或MLD??（半數(shù)致死量）；

• 典型劑量：小鼠103–10? PFU，雪貂10?–10? PFU。

四、模型評估指標

1. 臨床癥狀

• 體重下降（>15%需安樂s）；

• 活動減少、豎毛、呼吸急促等。

2. 病毒學指標

• 肺組織病毒載量（qPCR或噬斑試驗）；

• 鼻洗液/氣管分泌物病毒滴度。

3. 病理學分析

• 肺組織HE染色（炎癥、出血、肺泡損傷）；

• 免疫組化檢測病毒抗原分布。

4. 免疫應(yīng)答

• 血清抗體（ELISA檢測IgG/IgM）；

• 細胞免疫（流式檢測T細胞亞群）。

五、注意事項

1. 生物安全

• 流感病毒需在BSL-2及以上實驗室操作；

• 禽liu感高致病株（如H5N1）需BSL-3。

2. 動物福利

• 遵循“3R原則"（減少、替代、優(yōu)化）；

• 設(shè)置人道終點（如體重下降>20%需終止）。

3. 對照設(shè)置

• 陰性對照（PBS或未感染組）；

• 陽性對照（已知毒力株）。

六、常見問題與優(yōu)化

• 低致病性病毒不發(fā)病：可提高劑量或使用免疫缺陷小鼠（如STAT1?/?）；

• 動物個體差異：增加樣本量（每組至少5-8只）；

• 傳播模型構(gòu)建：需共飼養(yǎng)感染與未感染動物，監(jiān)測接觸傳播。